NS perbedaan utama antara nitroselulosa dan membran nilon adalah bahwa membran nitroselulosa memiliki afinitas tinggi untuk mengikat protein sedangkan membran nilon memiliki afinitas tinggi untuk mengikat asam nukleat. Selanjutnya, interaksi hidrofobik dan elektrostatik mengikat makromolekul ke membran nitroselulosa sementara interaksi ionik, hidrofobik, dan elektrostatik mengikat makromolekul ke membran nilon.

Membran nitroselulosa dan nilon adalah dua jenis membran tempat makromolekul dipindahkan dari gel. Namun, membran nitroselulosa dapat digunakan untuk mengikat DNA dan RNA juga.

Afinitas, Biodyne A, Biodyne B, Nitroselulosa, Asam Nukleat, Nilon, Ukuran Pori, Protein

Apa itu Membran Nitroselulosa?

Membran nitroselulosa adalah matriks umum yang digunakan dalam Western blotting karena afinitas pengikatan protein yang tinggi. Namun, ini dapat digunakan untuk mendeteksi asam nukleat selain dari protein dan glikoprotein yang tidak bergerak. Imobilisasi makromolekul terutama terjadi melalui interaksi hidrofobik. Ikatan hidrogen juga terbentuk antara gugus nitro pada membran dan rantai samping asam amino dari protein. Imobilisasi protein akan tinggi pada konsentrasi garam tinggi dan metanol rendah.

Gambar 1: Prinsip Blot

Membran nitroselulosa tersedia dalam 100% bentuk murni nitroselulosa dengan luas permukaan yang tinggi, yang seragam. Pra-ukuran yang tersedia adalah 0,2 m dan 0,45 m. Ukuran pori yang kecil lebih baik untuk pengikatan dengan protein kecil (<14 kDa). Kapasitas pengikatan dan retensi protein adalah 80-250 g/cm². Membran pra-rakitan siap digunakan. Salah satu keuntungan utama membran nitroselulosa adalah latar belakangnya yang sangat rendah karena dapat dengan mudah diblokir. Membran nitroselulosa yang didukung dapat dilucuti dan dipasang kembali.

Apa itu Membran Nilon?

Membran nilon adalah matriks yang banyak digunakan untuk pengikatan asam nukleat. Membran nilon secara mekanis lebih kuat daripada membran nitroselulosa. Dua jenis utama membran nilon yang digunakan dalam blotting adalah Biodyne A dan Biodyne B. Ukuran pori dari kedua jenis tersebut adalah 0,45 m. Mereka tahan terhadap panas dan pelarut. Juga, mereka tidak akan menyusut, retak atau sobek. Keduanya memberikan latar belakang yang rendah dibandingkan membran nitroselulosa.

Gambar 2: Membran Southern Blot

Persamaan Antara Membran Nitroselulosa dan Nilon

Perbedaan Antara Membran Nitroselulosa dan Nilon

Definisi

Membran nitroselulosa mengacu pada membran lengket yang digunakan untuk melumpuhkan asam nukleat dan protein dalam blotting sedangkan membran nilon mengacu pada jenis membran dengan kekuatan tinggi dan ketahanan panas yang digunakan untuk melumpuhkan makromolekul.

Terdiri dari

Membran nitroselulosa terdiri dari selulosa ternitrasi sedangkan membran nilon terdiri dari nilon Biodyne A dan Biodyne B yang tidak dimodifikasi atau bermuatan positif.

Ukuran Pori

Ukuran pori membran nitroselulosa adalah 0,2 m dan 0,45 m sedangkan ukuran pori membran nilon adalah 0,45 m.

Kekuatan

Membran nitroselulosa rapuh dan karenanya tidak dapat digunakan kembali sementara membran nilon kuat secara mekanis.

Metode Transfer

Transfer elektroforesis terutama digunakan dalam transfer protein ke membran nitroselulosa sementara transfer kapiler adalah praktik umum dengan membran nilon.

Afinitas

Membran nitroselulosa memiliki afinitas tinggi terhadap protein sedangkan membran nilon memiliki afinitas tinggi terhadap asam nukleat. Membran nitroselulosa juga dapat digunakan untuk asam nukleat.

Blotting

Membran nitroselulosa lebih baik untuk Western blotting sedangkan membran nilon lebih baik untuk Southern dan Northern Blotting.

Interaksi yang Mengikat

Interaksi hidrofobik dan elektrostatik mengikat makromolekul ke membran nitroselulosa sementara interaksi ionik, hidrofobik, dan elektrostatik mengikat makromolekul ke membran nilon.

Kapasitas Pengikatan Protein

Kapasitas pengikatan protein membran nitroselulosa adalah 80-250 g/cm² sedangkan kapasitas pengikatan protein membran nilon adalah 150-200 g/cm².

Kesimpulan

Membran nitroselulosa adalah membran rapuh yang terutama digunakan untuk melumpuhkan protein di Western blotting sedangkan membran nilon adalah membran kuat yang terutama digunakan untuk melumpuhkan asam nukleat. Membran nitroselulosa mengikat molekul melalui interaksi hidrofobik sedangkan membran nilon mengikat molekul melalui interaksi elektrostatik. Oleh karena itu, perbedaan utama antara membran nitroselulosa dan nilon adalah afinitasnya.

Referensi:

1. “Membran Nitroselulosa untuk Western Blotting | Thermo Fisher Scientific – LK.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, Tersedia Di Sini2. “Membran Nilon Biodina A, 0,45 m, 8 Cm x 12 Cm.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, Tersedia Di Sini3. “Membran Nilon Biodina B, 0,45 m, 8 Cm x 12 Cm.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, Tersedia Di Sini

Gambar Courtesy:

1. "Blot biologi" Oleh Gbdivers - Karya sendiri (CC BY-SA 3.0) melalui Commons Wikimedia2. "Selatan blot selatan" Oleh Bojan unar - Karya sendiri (CC BY-SA 4.0) melalui Commons Wikimedia